此方法就是个普通的方法,并遵循一个相当标准的过程
此控件将衡量此转化的效率,并提供一个参考,用于比较之前的转化实验。井上等人。 (1990) 种制备感受态大肠杆菌的方法方法,充其量可以挑战方法(1983;et al.1991;参见方案 1) 以了解效率。
然而,在标准实验室条件下,效率通常为 1X108~3X108 转化菌落/μg 质粒 DNA。这种方法的优点是要求比原来的方法(1983).
此方法与其他方法的不同之处在于,细菌培养物在 18'C 而不是常规的 37°C 下生长。除此之外,这种方法是一种常见的方法,并且遵循相当标准的程序。低温下细胞生长影响转化效率的原因尚不清楚。
这可能是由于细菌细胞膜在 18C 下合成 有利于 DNA 吸收的成分或物理特性,或者可能是有利于有效转化的生长周期阶段延长了。
在 18C 下培养细菌是一项挑战。冬天将摇床保持在 18 摄氏度。
一种解决办法是把培养箱放在4"C的冷室里,通过温控将培养物加热到18C。另外,如果培养物在20~23C生长,效率损失很小,这是很多实验室常温。培养细胞在18C生长缓慢,倍增时间2.5~4h。
这可能令人沮丧方法,尤其是在半夜,当上升到 0D600 时将永远无法达到所需的 0.6。为了解决这个问题,晚上开始培养,第二天早上就收获了细菌。这种方法适用于一些大肠杆菌菌株,尤其是 DHSa 和 XL1-Blue。